miércoles, 29 de abril de 2020

Evaluación de la actividad e inhibición enzimática de la polifenoloxidasa en el extracto crudo del fruto del chile habanero (Capsicum chinense Jacq)



Milca Álvarez-López1,  María de Lourdes Vargas-y-Vargas2, Gabriel Lizama-Uc2, Herbert Loría-Sunza2, Carlos Hernán Herrera-Méndez3 y Jorge Abraham Tamayo-Cortez2

1Tecnológico Nacional de México. Instituto Tecnológico de Mérida. Departamento de Ingeniería Química y Bioquímica. Centro de Graduados e -Investigación. Av. Tecnológico S/N km 4.5. Mérida, Yucatán, C.P. 97118, México. 1Alumno. 2Catedrático, División de Estudios de Posgrado e Investigación, Instituto Tecnológico de Mérida, Mérida, México 3Catedrático externo
3Departamento de Ingeniería Agroindustrial, Campus Celaya-Salvatierra, Universidad de Guanajuato, Salvatierra, México.
Autor de contacto: jtamayin@hotmail.com

RESUMEN

Las enzimas polifenoloxidasas (PPO) fueron extraídas del chile habanero (Capsicum chinense Jacq), por la adición de polivinil pirrolidona (PVP), se varió la concentración de PVP (0, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25g), en donde fue elegido el de 0.2 g de PVP, debido a que se observó una mayor actividad de PPO, seguido de precipitación con 20, 40, 60 y 80 % de saturación de sulfato de amonio, a una temperatura de 4 C. La actividad máxima se observó en la fracción obtenida con 40 % de saturación de sulfato de amonio. La posterior caracterización y determinación de la actividad en el extracto crudo se presume que cuenta con actividad difenolasa ya que presentó actividad sobre los sustratos difenólicos: pirocatecol 0.6M, catequina 0.005M y L-tirosina 0.025M y se tomó la decisión de trabajar con catequina 0.005M. Las condiciones para cada sustrato empleado fueron las mismas: los tres sustratos, se diluyeron con buffer de fosfatos 0.01M con un pH 7 y se mantuvieron a una temperatura de 30 C. Se usaron como inhibidores el ácido ascórbico, acido aspártico, ácido cítrico, ácido tartárico, cisteína, fenilalanina, tirosina y miel. Para cada uno de ellos se prepararon las siguientes concentraciones 0.02, 0.04, 0.06 y 0.08 M a excepción de la miel, sobre la actividad de PPO. La mayor actividad se presentó en pirocatecol 0.6 M con 7261.68 U y la menor actividad se presentó con tirosina a partir de 0.0025 M con 1098.33 U. Aunque la catequina y L- tirosina se evaluaron a una concentración de saturación menor que el pirocatecol. Los valores aparentes KM y Vmax en los inhibidores químicos fueron los siguientes: ácido ascórbico KM 0.6 mM y Vmax 2x10-13 U. de act/mg.min, en cisteína KM 0.496243 mM y Vmax 4.173622 U. de act/mg.min. Los inhibidores, cisteína, y ácido ascórbico, fueron efectivos cuando se evalúo la actividad de PPO sobre el sustrato catequina.

Palabras clave: inhibición  enzimática, polifenoloxidasas, chile habanero, Capsicum chinense Jacq


Para citar:

Álvarez-López, M.,  Vargas-y-Vargas, M.L., Lizama-Uc, G., Loría-Sunza, H., Herrera-Méndez, C.H. y Tamayo-Cortez, J.A. (2019). Evaluación de la actividad e inhibición  enzimática de la polifenoloxidasa en el extracto crudo del fruto del chile habanero (Capsicum chinense Jacq). Revista del Centro de Graduados e Investigación. Instituto Tecnológico de Mérida, 34(77),191-198




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