sábado, 7 de septiembre de 2019

Generación de virus de influenza a recombinantes utilizando genética reversa



Karina Ciau-Carrillo1Cristal Alvarez-Sánchez2, Refugio González-Losa2, Laura Conde-Ferráez2 y Guadalupe Ayora-Talavera2

Centro de Investigaciones Regionales “Dr. Hideyo Noguchi”, Unidad Inalámbrica, Campus Ciencias de la Salud, calle 43 #613 x calle 90, Col. Inalámbrica, CP.97069 Mérida, Yucatán, México.
Autor de correspondencia: jacquelineciau@hotmail.com

RESUMEN

Influenza A es una enfermedad infecciosa respiratoria aguda, considerada como uno de los principales problemas epidemiológicos pues se estima que el 20% de la población mundial es afectada cada año. Hemaglutinina y Neuraminidasa son  proteínas de superficie del virus las cuales son responsables de la infección mediante el reconocimiento del ácido siálico en los receptores de células epiteliales y de la liberación de progenie viral respectivamente, sin embargo su impacto en la biología del virus es considerable debido a la presencia de altas tasas de mutación en ambas proteínas, las cuales pueden llegar a conferir ventajas a la evasión del sistema inmune del huésped por sus efectos en la replicación viral. Para comprender como estos cambios afectan en la replicación del virus de influenza A se realizó mutagénesis sitio-dirigida con cebadores específicos para los cambios A134T, N125D y A141T en el gen de la Hemaglutinina, y el cambio N341S para el gen Neuraminidasa de la cepa viral A/Yucatán/2370/09. Los genes mutados fueron clonados al vector de expresión pHW2000, los plásmidos recombinantes fueron transfectados en co-cultivo con células MDCK y 293T para el rescate de virus recombinantes. Se realizaron cinéticas de crecimiento viral con los virus recombinantes obtenidos, los resultados fueron analizados con ANOVA de una vía en el software “Graphpad ®”; los resultados demostraron que la mutación A134T tuvo efecto sobre la replicación viral, sin embargo, A141T y N341S no tuvieron ningún efecto, mientras que para N125D no fue posible el rescate de virus.

Palabras clave: Cinética/ Clonación/ Mutagénesis/ Plásmido/ Secuenciación.


Para citar:

Ciau-Carrillo, K., Alvarez-Sánchez, C., González-Losa, R., Conde-Ferráez, L. y Ayora-Talavera, G. (2018) Generación de virus de influenza a recombinantes utilizando genética reversa. Revista del Centro de Graduados e Investigación. Instituto Tecnológico de Mérida, 33(73),35-363



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