Karina Ciau-Carrillo1, Cristal Alvarez-Sánchez2, Refugio González-Losa2, Laura Conde-Ferráez2 y Guadalupe Ayora-Talavera2,
Centro de Investigaciones
Regionales “Dr. Hideyo Noguchi”, Unidad Inalámbrica, Campus Ciencias de la
Salud, calle 43 #613 x calle 90, Col. Inalámbrica, CP.97069 Mérida, Yucatán,
México.
Autor de correspondencia: jacquelineciau@hotmail.com
RESUMEN
Influenza A es una
enfermedad infecciosa respiratoria aguda, considerada como uno de los
principales problemas epidemiológicos pues se estima que el 20% de la población
mundial es afectada cada año. Hemaglutinina y Neuraminidasa son proteínas de superficie del virus las cuales
son responsables de la infección mediante el reconocimiento del ácido siálico
en los receptores de células epiteliales y de la liberación de progenie viral
respectivamente, sin embargo su impacto en la biología del virus es considerable
debido a la presencia de altas tasas de mutación en ambas proteínas, las cuales
pueden llegar a conferir ventajas a la evasión del sistema inmune del huésped
por sus efectos en la replicación viral. Para comprender como estos cambios
afectan en la replicación del virus de influenza A se realizó mutagénesis
sitio-dirigida con cebadores específicos para los cambios A134T, N125D y A141T
en el gen de la Hemaglutinina, y el cambio N341S para el gen Neuraminidasa de
la cepa viral A/Yucatán/2370/09. Los genes mutados fueron clonados al vector de
expresión pHW2000, los plásmidos recombinantes fueron transfectados en
co-cultivo con células MDCK y 293T para el rescate de virus recombinantes. Se
realizaron cinéticas de crecimiento viral con los virus recombinantes obtenidos,
los resultados fueron analizados con ANOVA de una vía en el software “Graphpad ®”; los resultados demostraron
que la mutación A134T tuvo efecto sobre la replicación viral, sin embargo,
A141T y N341S no tuvieron ningún efecto, mientras que para N125D no fue posible
el rescate de virus.
Palabras clave:
Cinética/ Clonación/ Mutagénesis/ Plásmido/ Secuenciación.
Para citar:
Ciau-Carrillo, K., Alvarez-Sánchez, C.,
González-Losa, R., Conde-Ferráez, L. y Ayora-Talavera, G. (2018) Generación de virus de influenza a recombinantes utilizando genética reversa. Revista del Centro de Graduados e Investigación.
Instituto Tecnológico de Mérida, 33(73),35-363
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