Amplificación isotérmica mediada por horquillas (LAMP) dirigida a los genes sca1 y 17 Kda para diagnóstico de Rickettsia typhi

Amplificación isotérmica mediada por horquillas(LAMP) dirigida a los genes sca1 y 17 Kda para diagnóstico de Rickettsia typhi

José Efraín Ramírez-Benítez¹, Gicel Ivette Gutiérrez-Torres², Laura Alicia Villalobos-Rodríguez², Norma Laura Rodríguez-Ávila³, Oscar Hernández-Vázquez², Karla Rossanet Dzul-Rosado⁴, César Israel Lugo-Caballero⁴ y Jorge Zavala-Castro⁴

¹Facultad de Ciencias Químico-Biológicas, Universidad Autónoma de Campeche (UAC). Unidad Habitacional Siglo XXIII por Avenida Ing. Humberto Lanz Cárdenas, Kalá, Campeche, Campeche, México CP 24085

²Centro de Investigaciones Biomédicas, Universidad Autónoma de Campeche (UAC). Av Patricio Trueba de Regil, Lindavista CTM, Campeche, Campeche, México. CP. 24096

³Tecnológico Nacional de México. Instituto Tecnológico de Chiná. Calle 11 s/n entre 22 y 28 Chiná, Campeche, CP 24520

⁴Centro de Investigaciones Regionales Dr. Hideyo Noguchi. Avenida Itzáes, No. 490 x Calle 59, Col. Centro, Mérida, Yucatán, México. CP 97000.

*Autor de correspondencia: jeramire@uacam.mx

RESUMEN

La Amplificación Isotérmica Mediada por horquillas (LAMP) es una nueva técnica de diagnóstico que se ha aplicado para la detección de Rickettsiosis en diferentes modelos. Sin embargo, sus límites de detección mostraron ser inferiores a la PCR cuando se diseñaron cebadores dirigidos a los genes sca5 y ompB. Existen otros genes como sca1 y 17 KDa que podrían ser blancos promisorios para el diagnóstico. El objetivo de este trabajo fue determinar la utilidad de los genes sca1 y 17 KDa para el diagnóstico para Rickettsia typhi, mediante amplificación isotérmica mediada por horquillas. La amplificación LAMP se monitoreó en tiempo real, usando Bst ADN polimerasa a una temperatura de 65 º C y 15 min, el agente intercalador Evagreen y 100 µg de ADN proveniente de pacientes infectados con R. typhi. El tamaño de los productos de amplificación obtenidos concordó con los esperados para los genes sca1 y 17 KDa de Rickettsia typhi. Las pruebas de sensibilidad mostraron un nivel de detección positivo con muestras de ADN diluidas hasta 10⁴ veces en su punto máximo de parasitemia. El tiempo requerido para la prueba LAMP es 6 veces menor que el necesario para una prueba por PCR convencional. En este trabajo se confirmó la utilidad de los genes sca1 y 17 KDa como diana para la amplificación isotérmica LAMP en ADN genómico de Rickettsia.

Palabras clave: Rickettsia, Amplificación isotérmica, 17KDa

Para citar:

Ramírez-Benítez, J.E., Gutiérrez-Torres, G.I., Villalobos-Rodríguez, L.A., Rodríguez-Ávila, N.L., Hernández-Vázquez, O., Dzul-Rosado, K.R., Lugo-Caballero, C.I. y Zavala-Castro, J. (2018) Amplificación isotérmica mediada por horquillas (LAMP) dirigida a los genes sca1 y 17 Kda para diagnóstico de Rickettsia typhi. Revista del Centro de Graduados e Investigación. Instituto Tecnológico de Mérida, 33(73),399-402