Comparación de métodos de extracción de ADN a partir de células epiteliales bucales

Comparación de métodos de extracción de ADN a partir de células epiteliales bucales

Salette Cambrano-Ancona^1,2, Luz Maurina Luna-Jiménez^1,3, Nuvia Eugenia Kantún-Moreno¹, María del Refugio González-Losa¹, Guadalupe Ayora-Talavera¹, Jesús Gómez-Carballo¹ y Laura Conde-Ferráez¹

¹Centro de Investigaciones Regionales “Dr. Hideyo Noguchi”, Unidad Inalámbrica, Campus Ciencias de la Salud, calle 43 #613 x calle 90, Col. Inalámbrica, CP.97069 Mérida, Yucatán, México.

²Universidad Autónoma de Yucatán. Facultad de Ingeniería Química, Periférico Norte, Kilómetro 33.5, CP. 97203. Mérida, Yucatán, México.

³Universidad Tecnológica de Usumacinta. Libramiento Glorieta Emiliano Zapata-Tenosique s/n ,CP. 86900. Col. Las Lomas, Emiliano Zapata, Tabasco, México

 Autor de correspondencia: e-mail: laura.conde@correo.uady.mx

RESUMEN

Extraer ADN a partir de células epiteliales bucales tiene una limitante: el rendimiento y cantidad de ADN son bajos en comparación con aquellos obtenidos a través de sangre periférica. Entre las ventajas de utilizar métodos caseros para extraer ADN están su bajo costo y alto rendimiento. No obstante, estos métodos son susceptibles a contaminación, variación y errores por los múltiples pasos de manipulación, en comparación con los kits comerciales que permiten obtener resultados confiables, ya que tanto la recuperación del ADN como la eliminación de los contaminantes son muy eficientes. Para evaluar concentración, pureza e integridad del ADN de células epiteliales bucales se compararon cuatro métodos de extracción: dos métodos caseros (método de extractos crudo y por proteinasa K) y dos kits comerciales DNeasy Blood & Tissue kit de QIAGEN® y MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation kit de ROCHE®. La integridad del ADN extraído se verificó mediante la reacción en cadena de la polimerasa amplificando los genes β-Globina y GADPH. Los resultados mostraron diferencias significativas (p < 0.001) en cantidad, pureza e integridad del ADN entre los distintos métodos. El kit comercial DNeasy Blood & Tissue kit de QIAGEN® resultó el más adecuado ya que arrojó un mayor número de valores con pureza y concentración óptimos del material genómico. Los resultados de este método se utilizaron para comparar la amplificación a los genes β-Globina y GADPH, de los cuales, el par de oligonucleótidos para GADPH mostraron mejor desempeño en la determinación de la integridad del ADN.

Palabras clave: ADN, PCR, células epiteliales bucales

Para citar:

Cambrano-Ancona, S., Luna-Jiménez, L.M., Kantún-Moreno, N.E., González-Losa, M.R., Ayora-Talavera, G., Gómez-Carballo, J. y Conde-Ferráez, L. (2018) Comparación de métodos de extracción de ADN a partir de células epiteliales bucales. Revista del Centro de Graduados e Investigación. Instituto Tecnológico de Mérida, 33(73),313-317