lunes, 8 de julio de 2019

Validación de la técnica RT-PCR tiempo real para genes involucrados en mecanismos epigeneticos en O. niloticus



Albornoz-Abud2, Nacira A.; Collí-Dulá1,2, Reyna C.; Zapata-Pérez2, José O.  y Marín-Canul3, Gerson F.

1CONACYT, 2Departamento de Recursos del Mar, Cinvestav del IPN, Unidad Mérida, Yucatán, México, 3ITESCAM, Calkiní, Campeche, México.
Autor de correspondencia: rcolli.dula@cinvestav.mx

RESUMEN

El Benzo[a]pireno (BaP) es un hidrocarburo policíclico aromático (HAP) ubicuo, descrito como carcinogénico, genotóxico, mutagénico y disruptor endocrino. Los HAP han sido catalogados como modificadores epigenéticos debido a que causan cambios en la metilación global del ADN que pueden llevar a la inestabilidad genómica y posteriores efectos en el fenotipo. Estudios diversos han detectado efectos en enzimas involucradas en la metilación del ADN cómo las enzimas DNMT y TET (DNA Methytransferases y Ten Eleven Translocation enzymes, respectivamente). Así como la cuantificación de cambios en la expresión génica la cual puede ser utilizada para detección temprana y predicción de posibles eventos en expresión fenotípica. Por lo cual, el objetivo del presente estudio fue validar reacciones de qPCR (quantitative Polymerase Chain Reaction) del gen DNMT1 y TET3 en una especie no modelo O. niloticus de importancia ecológica y económica, para evaluar el efecto del BaP en dichos genes. En este estudio, tilapias adultas fueron expuestas a una dosis aguda de BaP (40mg.kg-1), se tomaron muestras de hígado y gónada a 24, 48, 72 y 120 h para posteriormente extraer el ARN, realizar el análisis de qPCR y validar las curvas estándar para los genes objetivo mediante el método 2-∆∆CT. En los resultados, se obtuvieron buenas eficiencias en las reacciones de qPCR y una adecuada validación de las curvas estándar. Por lo tanto, los niveles de expresión de los genes TET3 y DNMT1 para tilapia, pueden ser medidos confiablemente utilizando las condiciones optimizadas y descritas de los cebadores validados en este trabajo.

Palabras claves: Benzo [a] pireno, RT-PCR tiempo real, epigenéticos.

Para citar:

Albornoz-Abud, N.A., Collí-Dulá, R.C., Zapata-Pérez, J.O.  y Marín-Canul, G.F. (2018) Validación de la técnica RT-PCR tiempo real para genes involucrados en mecanismos epigeneticos en O. niloticus. Revista del Centro de Graduados e Investigación. Instituto Tecnológico de Mérida, 33(73),119-122




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